ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИИ
АС - антисыворотка
ЛД50 - доза, вызывающая гибель 50% животных
ЛДюо — доза, вызывающая гибель всех животных
МБсК - минимальная бактериостатическая концентрация
МБцК - минимальная бактерицидная концентрация
МПА - мясопептонный агар
МПБ - мясопептонный бульон
МПД — максимальная переносимая доза
ОП - оптическая плотность
РТ - Республика Таджикистан
САП-2 - синтетический аналог пурина
ТАУ — Таджикский аграрный университет
ТаджНИВИ - Таджикский научно-исследовательский
ветеринарный институт ТАСХН - Таджикская академия сельскохозяйственных наук
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Пастереллез птиц представляет серьезную угрозу эпизоотическому благополучию птицеводства Республики Таджикистан и наносит отрасли значительный экономический ущерб. Заболевание приобрело широкое распространение в Таджикистане, и его удельный вес в числе других инфекционных болезней значительно возрос. Трудность профилактики пастереллеза обусловливается тем, что эффективность существующих вакцин в каждом конкретном случае зависит от соответствия по соматическому О-антигену вакцинных и эпизоотических штаммов пастерелл [32].
В комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий при бактериальной патологии важным элементом является использование химиотерапевтических средств, среди которых широкое применение нашли антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие химиотерапевтические препараты. Однако в связи с развитием резистентности микроорганизмов к используемым лекарствам остро стоит проблема разработки эффективных синтезированных средств лечения и профилактики бактериальных инфекций птиц [4, 58, 74, 109].
В течение последнего десятилетия значительно расширились исследования в области химии и биологической активности конденсированных производных 1,3,4-тиадиазола, среди которых особое место занимают 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидины.
Таджикским научно-исследовательским ветеринарным институтом Таджикской академии сельскохозяйственных наук разработан и
V
изготовлен препарат САП-2 (синтетический аналог пурина) — смесь (1:1) 8(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромида с сахарозой, имеющий широкий спектр антибактериального действия и проявляющий высокую активность в отношении этиологически значимых в промышленном птицеводстве бактерий.
Цель исследований - изыскать и предложить для внедрения в ветеринарную практику новое химиотерапевтическое средство для лечения и профилактики бактериальных болезней птиц, обладающее высокой бактерицидностью и не оказывающее отрицательное влияние на резистентность организма.
Для достижения этой цели решены следующие задачи:
изучить антимикробную активность САП-2 в отношении возбудителей наиболее распространенных бактериальных заболеваний птиц;
исследовать в опытах на лабораторных животных и цыплятах острую и хроническую токсичность препарата;
изучить в опытах на цыплятах лечебную и профилактическую эффективность САП-2, определить оптимальные дозы, разработать схемы применения препарата;
провести производственные испытания терапевтической и профилактической эффективности САП-2 при пастереллезе птиц.
Научная новизна. Разработан новый препарат САП-2, выявлена его антимикробная активность, исследованы токсико-фармакологические свойства, влияние на защитные механизмы
•7
организма птиц, определена лечебная и профилактическая эффективность препарата при пастереллезе птиц.
Практическая ценность. Высокая бактерицидная активность САП-2, низкая токсичность и незначительное влияние препарата на защитные механизмы организма позволяют рекомендовать препарат САП-2 для внедрения в ветеринарную практику в качестве терапевтического и профилактического средства при бактериальных болезнях птиц.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
1. Результаты изучения антимикробной активности САП-2 в отношении Staphilococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Pasteurella multocida, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Klebsiella pneumoniae.
2. Результаты исследования острой и хронической токсичности препарата.
3. Результаты экспериментального изучения лечебной и профилактической эффективности САП-2.
4. Результаты производственных испытаний терапевтической и профилактической эффективности препарата при пастереллезе птиц.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета Таджикского аграрного университета (2001 - 2003); республиканских и областных семинарах-совещаниях ветеринарных работников РТ (2001 - 2003); Международной конференции ВНИВИ патологии, фармакологии и
ч
8
терапии РАСХН «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях» (Воронеж, 2002); Международной научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» (Санкт-Петербург - Ломоносов, 2004).
Публикации. По результатам исследований опубликованы 4 научные работы. Получено уведомление Национального патентно-информационного центра РТ №02000745 (от 13.05.2002 г.) о положительном результате формальной экспертизы по заявке на изобретение «8(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромид, проявляющий антибактериальную активность».
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.
Диссертация изложена на 111 страницах, иллюстрирована 11 таблицами и 10 рисунками. Список литературы содержит 208 источников. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Пастереллез птиц
Пастереллез (холера птиц, птичья холера, птичий пастереллез, птичий геморрагический сепсис) - инфекционная болезнь, поражающая домашних и диких птиц [147, 146, 199]. Обычно проявляется в септической форме, характеризующейся высокой ¦>' * заболеваемостью и смертностью [34], но довольно часто может
протекать хронически или в легкой форме [86].
Возбудителем пастереллеза является Pasteurella multocida -грамотрицательная неподвижная неспорогенная палочка (0,2 - 0,4 х 0,6 — 2,5 мкм, но может принимать другую форму после повторного пересева), причем палочки встречаются как по отдельности, так и в парах, а иногда в виде цепочек или нити [165]. У недавно выделенных культур согласно косвенным методам окрашивания наблюдается капсула. В тканях, крови и недавно выделенных культурах -^, микроорганизм окрашивается биполярно. Возможно наличие фибрилл
[15, 127, 128, 195]. По иммунологической классификации Робертса или Картера пастереллы делятся на четыре типа - А, В, С, D. Большинство штаммов, выделенных от птиц, относится к типу А [21, 22, 62, 115, 118].
Инфекцию распространяют больные и переболевшие домашние и дикие птицы [11], животные [154, 168, 205], грызуны, насекомые [183], она передается через яйца, полученные от больных птиц [27]. Большую опасность представляет заражение кур при расклевывании инфицированных трупов птиц [41, 69].
м
10
Чаще всего невозможно определить, каким образом возбудитель пастереллеза попадает в скопление птиц. Главными источниками распространения инфекции считаются хронически инфицированные птицы, продолжительность жизни которых является единственным пределом хронического носительства [5, 51, 55, 105].
Сезонностью, стационарностью, пастереллоносительством и хронической формой проявления этой болезни или диагностированием смешанной инфекции чаще всего определяются особенности течения пастереллеза [24, 40, 73, 152, 169].
Наибольшее распространение пастереллез получает в весенний, осенне-зимний периоды. Основной причиной возникновения заболевания скорее могут считаться погодные условия, чем пониженная сопротивляемость, за исключением того, что с достижением зрелости птицы становятся более восприимчивыми. Неблагоприятные условия содержания (низкая температура, высокая влажность, сырость и уменьшенная солнечная радиация, изменения в питании, повреждения и волнения) снижают естественную устойчивость организма и предполагают к заболеванию пастереллезом [7, 60, 121, 129, 137, 141].
Не исключая влияния неблагоприятных факторов на появление, распространение и течение пастереллеза, некоторые исследователи [87, 124] отрицательно относятся к теории о широком пастереллоносительстве птиц и считают, что болезнь возникает в хозяйстве только при заносе вирулентного возбудителя извне.
В скоплениях птиц распространение P. multocida происходит прежде всего за счет выделений изо рта, носа и конъюнктивы больных
11
птиц, которые контаминируют среду обитания, особенно корм и воду. В фекалиях очень редко содержится жизнеспособная P. multocida [194, 197].
Наиболее восприимчивы к пастереллезу, поражающему все виды домашней птицы всех возрастных групп, цыплята 2 - 3-месячного возраста и старше, смертность среди которых достигала 80% [50, 120], а среди взрослых птиц - 95 - 100% [48], большей устойчивостью обладают цыплята до 2-месячного возраста [49, 129, 131, 143, 192, 193, 203,208].
У молодых цыплят пастереллез обычно вызывается серотипом А и часто протекает в осложненной некоторыми другими болезнями форме [38].
Чрезвычайно восприимчивы к заболеванию пастереллезом одомашненные гуси и утки [138,144,147].
В литературе описаны несколько форм пастереллеза: молниеносная, острая, подострая и хроническая [57, 114].
При молниеносном течении куры погибают, не проявляя клинических признаков заболевания. Изменения в трупах птиц отсутствуют [8, 89, 101].
При острой форме течения пастереллеза, продолжающегося 1-3 дня, признаки инфекции (появление лихорадки, анорексии, взъерошенного оперения, слизистых выделений изо рта, поноса и увеличенной интенсивности дыхания) зачастую можно наблюдать только за несколько часов перед смертью, незадолго до которой часто проявляется цианоз, наиболее очевидный на неоперенных областях
12
головы. При поносе фекальный материал первоначально водянистый, беловатого цвета, позже становится зеленоватым и содержит слизь [12, 57, 88, 99, 106]. У птиц, переживших начальную острую септическую стадию, позже могут появиться признаки истощения и дегидратации, хронического инфицирования, но может наступить и выздоровление [8, 80,90,149].
Сходно с острым подострое течение пастереллеза, ^ - продолжающееся 4 — 7 дней, но клинические признаки менее выражены
[71,89,112, 133,155].
Вслед за острой стадией болезни или при инфицировании слабо вирулентным микроорганизмом может развиться хронический пастереллез, продолжающийся длительно (несколько недель, а то и месяцев), признаки которого вообще носят локальный характер. У больных кур отмечали слизисто-гнойные истечения из ноздрей, кашель, затрудненное дыхание, конъюнктивит, иногда отек сережек, межчелюстного пространства, поражение суставов ног и крыльев, у -^L, некоторых — перитониты, прогрессирующее исхудание. Возможно
также экссудативное выделение из конъюнктивы, повреждение глотки и иногда «кривая шея». При развитии инфекционных заболеваний в дыхательных путях птиц возникают трахеальные хрипы и одышка. Хронически инфицированные птицы могут умереть, остаться инфицированными в течение длительного времени или выздороветь [37, 72,89,97, 101, 112,173].
При пастереллезе повреждения являются не постоянными, но изменяются в зависимости от их типа и серьезности. Наиболее сильные
13
повреждения связаны с течением болезни: острым или хроническим. Признаки инфекции и повреждений могут быть промежуточными по отношению к признакам острой и хронической форм течения пастереллеза птиц [86, 104].
При остром течении пастереллеза наблюдается ярко выраженный геморрагический диатез, бронхопневмония. Кровоизлияния различной формы и величины обнаруживали на легких, эпикарде, серозных оболочках: брыжейке, яичнике, семенниках, слизистой кишечника (особенно двенадцатиперстной кишки). Печень в состоянии паренхиматозного перерождения, желтовато-зеленого или сероватого цвета, плотной консистенции, покрыта точечными сероватыми очажками некроза [1, 8,12, 61, 89,101,102,112,155,190,198].
С изменениями в сосудистой системе птиц связано большинство посмертных повреждений, если болезнь принимает острый характер. Обычно наблюдается общая гиперемия, которая наиболее очевидна в венах внутренних органов и лишь слегка заметна в небольших сосудах слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. При микроскопическом рассмотрении гиперемированного сосуда наблюдается большое число бактерий. Часто отмечается увеличение количества перикардиальной и перитониальной жидкости, распространение внутрисосудистого свертывания крови или фибринозный тромбоз у цыплят и утят, которые умерли от острой формы течения экспериментально спровоцированного пастереллеза [2, 103, 187].
14
При пастереллезе птиц часто поражаются яичники куриц-несушек. Зрелые фолликулы кажутся вялыми; оболочковые кровеносные сосуды, которые в норме доступны наблюдению, просматриваются не так хорошо. Желтковый материал из разорванных фолликул может находиться в брюшной полости. Фолликулы и строма яичников часто имеют гиперемированный характер [167, 191].
При хроническом пастереллезе у больных птиц наблюдаются: ^- истощение, поражение бородок и межчелюстного пространства
(скопление фибринозно-гнойного экссудата между листами бородок и межчелюстного пространства) [61, 72, 123].
При хроническом пастереллезе преобладает поражение респираторной системы: риниты и трахеиты, гнойные пневмонии, фибринозные плевриты [57, 61, 89, 159], поражение воздухоносных мешков с отложением фибринозно-казеозных масс [23].
В хронический процесс могут вовлекаться среднее ухо и черепные
кости, что может привести к развитию «кривой шеи». У индюшат это и,
^., возможно, смерть могут быть связаны с инфекционными болезнями
черепных костей, среднего уха и оболочек головного мозга [148, 185,
186].
На основе клинических наблюдений, результатов вскрытия трупа или выделения P. multocida может быть поставлен предполагаемый, на всех трех исследованиях должен быть основан заключительный диагноз пастереллеза птиц. Реакция непрямой гемагглютинации с использованием нативных тонизированных и формалинизированных тонизированных эритроцитов, сенсибилизированных лиофильно
15
высушенным капсульным антигеном, превосходит по чувствительности реакцию преципитации в капиллярах, реакцию агглютинации и реакцию иммунофлюоресценции и может быть использована для определения иммунитета у вакцинированной птицы. РПК с данной целью может быть использована только в качестве вспомогательного метода исследования [26, 107].
P. multocida может быть выделена из внутренностей птиц, которые умерли от острой формы пастереллеза, обычно из мест локализации повреждений; менее вероятно, чтобы ее можно было выделить от обезвоженных, изнуренных, после острого пастереллеза птиц. Предварительный диагноз острого пастереллеза может быть поставлен при обнаружении биполярных микроорганизмов в мазках-отпечатках печени, обработанных красителем Райта. Иммунофлюоресцентная микроскопия может использоваться для идентификации P. multocida в тканях или экссудате [95].
При лабораторной диагностике хронического пастереллеза необходимо проводить полное бактериологическое исследование патологического материала с обязательным высевом из мест поражения. Это способствует значительному увеличению процента изоляции пастерелл, а, следовательно, и эффективности диагностики заболевания. Культуры пастерелл, как правило, выделяются из мест поражения в начальной стадии воспаления при наличии серозного или серозно-фибринозного экссудата. В более поздние сроки, когда происходит скопление фибринозного экссудата или инкапсулирование
16
воспалительного очага, культуры P. multocida выделить очень трудно [74].
При ассоциированном течении хронического пастереллёза и колибактериоза одной из причин, затрудняющих бактериологическую диагностику, является антагонистическое действие, оказываемое культурами кишечной палочки на пастереллу [36].
Инокуляция животных может помочь при выделении P. multocida из загрязненных материалов. Обычно животное умирает в течение 24 -48 часов, а патологический микроорганизм может быть выделен в виде чистой культуры из сердца, крови или печени [51].
Острое течение пастереллёза птиц следует дифференцировать от Ньюкаслской болезни, стрептококкоза, колибактериоза,
стафилококкоза, пуллороза-тифа, респираторного микоплазмоза, спирохетоза, а при заболевании водоплавающих птиц от инфлюэнцы [48].
Серологический диагноз на пастереллез птиц ставят по быстрой реакции сывороточной агглютинации на предметном стекле или тестами диффузии в агаре. P. gallinarum и P. haemolytica - две родственные бактерии, которые могут быть выделены от заболевшей домашней птицы и неправильно идентифицированы как P. multocida [139, 150, 156, 158, 161, 174, 184, 203]. В большинстве случаев Р. haemolytica рассматривали в качестве вторичных болезнетворных микроорганизмов.
17
1.2. Методы и средства профилактики и терапии пастереллеза птиц
Практическая ветеринарная служба до сих пор не располагает системой ветеринарных и ветеринарно-санитарных мероприятий, позволяющих эффективно про фил актировать и бороться с пастереллезом птиц [28]. Трудность профилактики и мер борьбы с этим заболеванием заключается в том, что профилактическая эффективность применения существующих вакцин зависит от соответствия по г'-< соматическому О-антигену вакцинных и эпизоотических штаммов
пастерелл [17, 182].
Способность птиц вырабатывать поствакцинальный иммунитет приобретается с возрастом и сильнее выражена у взрослых птиц [18]. Иммунитет против пастереллеза начинает развиваться у цыплят с 30-дневного возраста, у утят - 20, у гусят - 10 и индюшат - с 13-дневного возраста [30]. Известно, что новорожденным свойственна пониженная реактивность, в этот период при многих болезнях она компенсируется у птиц оживленным фагоцитозом [163], но при пастереллезе у молодняка ~^L, птиц раннего возраста он выражен очень слабо. Несмотря на это,
молодняк птиц более устойчив к пастереллезной инфекции, чем взрослые особи, что, по-видимому, обусловливается тканевым иммунитетом, либо повышенной способностью клеток эпителиальных тканей слизистых оболочек противостоять проникновению возбудителя болезни. По мере дальнейшего физиологического развития защитная реакция тканей ослабевает, а гуморальные факторы защиты усиливаются [29]. |
